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磷的标定

Instrument​

eppendorf centrifuge 5810R
酶标仪
氮吹仪
与氮吹仪规格匹配的细长玻璃试管若干
玻璃珠

Reagent​

提前充分烘干的KH2PO4粉末
磷标准储存液，136.09 mg KH2PO4 in 100 ml deionized water, 用容量瓶(10 mM磷储存液)
磷标准工作液，将磷标准储存液稀释1000倍 (10 μM磷工作液)
中性过硫酸钾溶液，0.5 g过硫酸钾 in 10 ml deionized water, 调整PH到6.5, 每次新鲜配置
9.2N H2SO4，浓硫酸/水 (1/1, v/v)
钼酸盐溶液，2.4 g钼酸铵，0.15 g酒石酸锑钾，in 50 ml deionized water, 每次新鲜配置
MIX, 稀硫酸/钼酸盐溶液/去离子水 (1/1/18, v/v/v) 抗坏血酸溶液，0.1 g抗坏血酸 + 10 ml deionized water, 每次新鲜配置

Protocol​

无论是标准溶液还是待测样品, 关键是全部都要加到管底充分消解

  1. 标准管
    0.65mM 磷标准工作液 /μl051015202530
    deionized water /μl302520151050
  2. 待测样品加 X μl, 补足到30μl
  3. 每管加360μl过硫酸钾溶液
  4. 放置于氮吹仪上
  5. 管口放置一颗玻璃珠
  6. 设置90°C消解至少16小时以上
  7. 冷却至室温
  8. 玻璃管置于15ml离心管中, 将管壁上的液体离心至底部 (2000 rpm, 1 min )
  9. 每管加20μl稀硫酸
  10. 每管加50μl抗坏血酸溶液
  11. 每管加50μl钼酸盐溶液
  12. 最低速vortex
  13. 室温静置20分钟显色
  14. 取100μl加到96孔板中
  15. 测定700nm波长处吸光度

700是GB 11893-89的
820是feng以前protocol里的, avanti也是
890是过硫酸钾消解参考文献10.1016/j.talanta.2009.01.029里的

实际上, 酶标仪测得钼蓝的最大吸收峰在740

600 120 90 90