磷的标定
Instrument
eppendorf centrifuge 5810R
酶标仪
氮吹仪
与氮吹仪规格匹配的细长玻璃试管若干
玻璃珠
Reagent
磷标准储存液，884.56 mg KH2PO4 in 100 ml deionized water, 用容量瓶(65 mM磷储存液)
磷标准工作液，将磷标准储存液稀释100倍 (0.65 mM磷工作液)
8N H2SO4，10ml 98%浓硫酸 + 36 ml deionized water
抗坏血酸溶液，1 g抗坏血酸 + 10 ml deionized water, 每次新鲜配置
钼酸盐溶液，2.5 g钼酸铵，0.07 g酒石酸锑钾，in 100 ml deionized water, 每次新鲜配置
过硫酸钾溶液，0.5 g过硫酸钾 in 10 ml deionized water, 每次新鲜配置
Protocol
无论是标准溶液还是待测样品, 关键是全部都要加到管底充分消解
- 标准管
0.65mM 磷标准工作液 /μl 0 5 10 15 20 25 30 deionized water /μl 30 25 20 15 10 5 0 - 待测样品加 X μl, 补足到30μl
- 每管加360μl过硫酸钾溶液
- 放置于氮吹仪上
- 管口放置一颗玻璃 珠
- 设置90°C消解至少16小时以上
- 冷却至室温
- 玻璃管置于15ml离心管中, 将管壁上的液体离心至底部 (2000 rpm, 1 min )
- 每管加20μl稀硫酸
- 每管加50μl抗坏血酸溶液
- 每管加50μl钼酸盐溶液
- 最低速vortex
- 室温静置20分钟显色
- 取100μl加到96孔板中
- 测定700nm波长处吸光度
700是GB 11893-89的
820是feng以前protocol里的, avanti也是
890是过硫酸钾消解参考文献10.1016/j.talanta.2009.01.029里的
实际上, 酶标仪测得钼蓝的最大吸收峰在740